Jak pěstovat parazit v Apicoplast buňky v kultuře

apikoplastu jsoutypu intracelulární organely přítomné v jednobuněčných parazitů, kteří způsobují závažná onemocnění , jako je malárie , toxoplazmózy a kokcidiózy . Organely jsou složité struktury uvnitř buňky , které nemohou růst a množit sami . Vznikly -lipředek parazitů zachvátil další organismus , který byl pravděpodobně v souvislosti s červené řasy . Vzhledem k tomu, apikoplastu nejsou nezávislé buňky , nemohou být pěstovány v kultuře, samy o sobě . Pro jejich růst je třeba pěstovat parazity . Co bude následovat, jsou instrukce ke kultuřečervená fáze krvinek Plasmodium falciparum , který způsobuje malaria.Things budete potřebovat
Parasite skladem
RPMI 1640 kultivačního média
laminárním prouděním
autoklávu
Albumax II sérum náhradní
D - glukóza
Hypoxantine
HEPES
Gentamicin -sulfát
kultivačních baněk
Cell inkubátor
Červené krvinky
Zobrazit další instrukce
kultivace Plasmodium falciparum
1

Nastavte inkubátoru na 37 stupňů Celsia a upravit složení plynu na 1 procento kyslíku , 3 procent oxidu uhličitého , a 96 procent dusíku .
2

autoklávu všechny non - sterilní vybavení a materiály
3

Práce v laminárním prouděním pro udržení sterility připravit konečné médium přidánímnásledujícího do RPMI 1640 kultivačního média :

D - glukózy na konečnou koncentraci 20 mM . celým

Hypoxantine na konečnou koncentraci 0,2 mM . celým

HEPES na konečnou koncentraci 25 mM . celým

Gentamicin -sulfát na konečnou koncentraci 25 mg /L.

Albumax II na konečnou koncentraci 0,5 procenta w /v.
4

rozdělily celkovou částku média bylo dosaženo v předchozí krok do tolika kultivačních baněk , jak si přál, a umístit je na třepačce v inkubátoru .
5

Postřední dosáhla 37 stupňů Celsia , přidejte parazita zásob .
6

Změňte kultivačního média každý den , aby parazity dobře živený a naživu .
7

Přidat červených krvinek každý druhý den . Budou napaden novými parazity , které jsou generovány v kultuře . Pokud se příliš mnoho na baňce , rozdělit jeho obsah do dvou nebo více dalších ty .