GSH Obsah protokoly

Glutathion nebo GSH jeprotein nalezený v obou rostlin a živočichů . Pracuje na pomoc enzymových reakcí v detoxikaci látek znečišťujících životní prostředí . Kromě toho, že umožňuje přepravu aminokyselin v buňkách a pomáhá udržovat redukčních reakcí sulfhydryl proteinů . Protokoly GSH testu pomocí GSH nárazníky , normy, substrát , enzymy a činidla . V návaznosti na konkrétní postup je relevantní pro výsledek testu . Enzymatická Recyklace Metoda

enzymatická metoda recyklace , pro GSH , používá glutathion reduktázy kvantifikovat GSH . Tento protokol je speciálně určen pro plazmě , tkáních nebo kultivovaných buněčných vzorků . Přidat činidla DTNB ( kyselina 5 - 5' - dithio - bis - 2 - nitrobenzoová ) na GSH . Skupina sulfhydryl v GSH reaguje s činidlem , a produkuje žlutý kyseliny s názvem 5 - thio - 2 - nitrobenzoové kyseliny ( TNB ) . Přidat glutathion reduktázy na kyseliny a GSH směsi recyklovat GSH a produkují více kyseliny . V tomto postupu je rychlost produkce kyseliny je úměrná reakci recyklace GSH; proto , měří se absorbance kyseliny TNB za použití spektrofotometru . Absorbance poskytuje odhad skutečného množství GSH ve vzorku .
Jaterních buněk Glutathion test

Tento protokol analyzuje množství GSH do lidského hepatocelulárního karcinomu ( rakoviny jater ) buňky . Chcete-li provést tento postup , pomocí kolorimetrické metody pro GSH odhodlání snižovat a oxidaci GSH . Snižte GSH pomocí 5 -5 - dithiobis ( kyselina 2 - nitrobenzoová nebo DTNB ) tvoří

barevný produkt kyseliny 2 - nitro - 5 - thiobenzoové a oxidované glutathionu ( GSSG ) . Pomocí glutathion reduktázy redukovat za vzniku oxidovaného glutathionu GSH znovu . Za účelem měření množství GSH v jaterních buňkách , přečtěte si vzorek na 415 absorbance kineticky na čtečce mikrotitračních destiček .
Apoptózu

V této protokol , GSH se používá k detekci buněk apoptózu ( smrt) prostřednictvím měření poklesu sníženou GSH . Pokles koncentrace buněčné GSH jeukazatelem buněčné smrti . Skvrny ukázkové buňky s non - fluorescenční thiolite zeleně . Thiolite zelený se hromadí v cytosolu ( buňky v plazmě ) a mitochondrie ( elektrárna ) buňky . Pomocí průtokového cytometru na 490/520 nm představit množství GSH v buňkách .
Celková koncentrace GSH v živočišných a rostlinných vzorků

Změřte koncentraci celkem GSH jak redukované a oxidované formě v různých živočišných a rostlinných vzorků . Přidejte obecný thiolové činidlo , 5 - 5' - dithiobis [ 2-nitrobenzoové kyseliny ] . Thiol činidlo reaguje s GSH za vzniku 412 nm chromofor , kyselina 5 - thionitrobenzoic ( TNB ) a GS - TNB . Přidat glutathion reduktázy a beta - nikotinamidadenindinukleotidfosfát ( NADPH ) snížit GS - TNB . Glutathion také uvolní druhý TMB molekulu a recyklovat GSH . Kromě toho , každý oxiduje GSH ( GSSG ), přítomný ve směsi fromed z disulfidové reakce se také sníží na GSH . Použijte readeru při 405 nm číst úroveň absorbanci a uvést celkovou koncentraci GSH .