Jak se připravit visící kapku

Chcete-li zjistit 3D struktury proteinu , musíte se nejprve čistý krystal ní . Způsob zavěšení -drop používá kapku obsahem bílkovin řešení visící z sklíčkem . Pod touto visící kapka leží nádrž s vyšší koncentrací soli , než je pokles . V průběhu doby , vodní pára opouští pokles a končí v nádrži , což je protein ke krystalizaci . Každý protein vyžaduje odlišné podmínky (jako je koncentrace soli a pH ) a často pokusů a omylů, nabízí jediný způsob, jak najít tu správnou conditions.Things budete potřebovat klipart laboratorní plášť , rukavice a ochranu očí klipart mikropipety s pipetou tipy
1 molárního roztoku chloridu sodného v 0,05 molárním acetátového pufru , pH 4,7
2 ml Eppendorf zkumavky ( nebo podobný) klipart odstředivka
24 - jamková destička
vakuové mazivo v injekční stříkačce
Silikonizovaný krycí sklíčko
stlačeného vzduchu
pinzety
Clay (například modelovací hmoty nebo podobné)
50 mg /ml lysozymu v 0,05 molárním acetát tlumivého roztoku o pH 4,7
Zobrazit další instrukce

1

Nasaďte laboratorní zařízení ( kabát, rukavice a ochranné brýle ).
2

Pomocí mikropipety přidejte 1,1 ml roztoku chloridu sodného ( soli ) a octanu tlumivého roztoku do trubice Eppendorf .
3

Odstředivkauzavřená zkumavka Eppendorf s roztokem soli uvnitř něj asi pět minut při 13000 otáčkách za minutu. Nezapomeňte vyvážit odstředivku umístěním dalšího mikrozkumavky obsahující 1,1 ml vody se naproti a naproti na sůl roztokem trubice .
4

Přidá se 1 ml solného roztoku , abytak v24 - i talíř .
5

mazací stříkačky umístit tenkou vrstvu mazacího tuku kolem okraje to dobře . Dbejte na to, přidávat příliš málo , nebo příliš mnoho. Pokud přidáte příliš mnoho tuku , budetuk běžet dolů do studny a případně zničit váš experiment. Používáte-li příliš málo ,tak nebude vzduchotěsný a váš experiment nebude fungovat . Cílem pro jen tolik tuku , že krycí sklíčko a tuk tvoří vzduchotěsnosti později .
6

Roll hlínu rukama dělat čtyři malé kuličky a tlačit je do čtyř rohů24- dobře deska . Budou působit jako podpěra pro zajištění krytu desky nepřichází do styku s sklíčka .
7

Použít stlačený vzduch foukat prach pryč sklíčka . Držte sklíčko s párem čisté pinzety .
8

Suck až 4 mikrolitrů roztoku lysozymu s mikropipety , a tento roztok do středu sklíčka . Změna špičky pipety a přidejte 4 mikrolitrů solného roztoku . Jemně pipety nahoru a dolů , sání v kapalině a pak ji vyhostit , míchat solný roztok se roztoku lysozymu . Dbejte na to, míchat dva bez rozptylováníkapaliny celého sklíčka .
9

Otočte sklíčko přes rychle, takže se tekutina není sklouznout , a závod je kolmo na vrcholudobře . Dbejte na to, jemně zatlačte na něj tak , že tvoří vzduchotěsný uzávěr s tukem po celém okrajůdobře .
10

Zatlačte na kryt 24 jamkami na hliněných kuliček , a nechat deska na chladném místě .