Jak odstraňovat primer dimer

polymerázové řetězové reakce , PCR nebo , je technika v molekulární biologii použity k amplifikaci specifických oblastí DNA . PCR je závislá na primery , které jsou krátké vlákna DNA , které jsou komplementární a specifické pro DNA zájmu . Zatímco primery obecně bude vázat na DNA odpovídající jejich pořadí , ale občas bude vázat a rozšiřují se navzájem , což způsobuje jev známý jako základní dimer.Things budete potřebovat
sekvence primeru
Zobrazit další instrukce

1

Zkontrolujte obsah GC (počet G je a C je) ve vašem sekvence primeru . GC vazba je silnější než na lepení , protože dodatečné vodíkové vazby mezi guanin a cytosin . Optimální propojení je nejméně 50 procent obsahu GC .
2

Zkontrolujte teplotu žíhání vaší reakce. Nízké teploty žíhání , obecně definována jako 55 ° C nebo nižší , může dojít k nespecifické vazbě na základní nátěr , který může způsobit primerů dimery navíc k amplifikaci nesprávných genomových úseků .
3

Dvojitá -kontrolovat množství a koncentrace primerů , které jste přidali do PCR. Nadbytek primerů , obecně více než 75 pikomoly , může způsobit primer dimerů , stejně.