Metody pro kvasnice Tři hybridní systém

replikaci chromozomů , zpracování messenger RNA , translace proteinů a kritických rozhodnutí v raných fázích vývoje závisí na interakci DNA , RNA a bílkovin . Tyto interakce jsou základní biologické procesy genové exprese a proteosyntézy . Vědci často používají Saccharomyces cerevisiae , stejné druhy kvasinek používané v pečení a vaření , studovat geny , které kódují specifické proteiny a analyzovat interakce mezi proteiny a jiné molekuly . Droždí tři hybridní systém je jedním ze tří variant kvasinkového dvou - hybridní systém použit pro studium těchto interakcí . Two- Hybrid System

Metoda dvou hybrid se používá k detekci interakcí protein-protein tím, že hledá pro expresi reporterového genu . Mnohé proteiny mají alespoň dvě domény , nebo diskrétní strukturní a funkční jednotky . GAL4 ,protein nalezený v Saccharomyces cerevisiae , má DNA vazebnou doménu ( DBD ) a doménu aktivační ( AD ) . V této metodě , jeden hybridní protein je kondenzovaný s DBD a druhý k AD . No reportér gen je exprimován fúzí pouze jeden z hybridů . Vzhledem k tomu,GAL4 reportér gen je exprimován pouze tehdy, pokud jsou přítomny oba kříženci , interakce protein - protein je indikován .
Three - hybridní systém

tři hybridní metoda identifikuje reportér gen pro detekci interakce proteinu s RNA . První hybridní protein se skládá z DBD taveného přímo do RNA vazebné domény . Druhá se skládá z AD na GAL4 transkripční faktor související s RNA vazebného proteinu . V RNA vazebné domény interagují s hybridní molekuly RNA , která se váže na dva hybridní proteiny za vzniku komplexu . Tvorba komplexu spouští expresi reporterového genu GAL4 . Vzhledem k tomu,reportér gen je pouze zapnutý vytvoření tří hybridního komplexu , jeho přítomnost naznačuje interakci RNA a bílkovin .
One - hybridní systém

způsob one- hybrid se používá k detekci interakce proteinu s DNA . One- hybridní systém pojistky jeden protein , který spojuje AD přímo na DBD . Místo toho, aby identifikace reporterový gen , tato metoda hledá pro konkrétní protein, který musí rozpoznat cílové sekvence DNA . Přítomnost specifického proteinu označuje interakci proteinu s DNA .
One -Two hybridní systém

jeden-dva hybridní metoda se používá ke studiu protein - protein a protein- DNA interakce současně . Pomocí nově vyvinutých kmenů kvasinek , tato metoda využívá GAL4 reportérový gen pro identifikaci interakcí protein-protein a p53 konsensu pro identifikaci interakcí protein - DNA . Tato metoda se očekává, že výrazně zvýší přesnost experimentálních výsledků tím, že snižuje výskyt falešně pozitivních výsledků získaných v jiných hybridních systémů .